叉菜胶;卡拉胶Ingrin β5 Antibody硝基-甲牛磺胆酸-硫酸酯二钠盐TRAF1 (1F3) Rat mAb红色GL/甲基-2-FLAG peptideIngrin αV Antibody基三基化十一酸锌Ingrin αV Antibody2,二甲氧基嘧啶-5-酸
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产品名称 | 小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸试剂盒价格 |
规格 | 48T |
货号 | LZP8025 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
表米诺环素CAP1 (D2K3J) Rabbit mAb2-羟基酸
牛磺脱氧胆酸钠Ingrin α5 Antibody5-氨基-2-甲酸
四环素(国产)Ingrin α5 Antibody5-溴水杨酸
基氢化铜蛋白,盐酸奥普托欣CELSR2 (D2M9H) XP® Rabbit mAb5-氨基水杨酸
莫西菌素,莫西克汀YKL-40 (E2L1M) Rabbit mAb2,5-二甲基
莫西菌素,莫西克汀(标准品)Ingrin β1 Antibody-2-硝
氨力农Ingrin β4 Antibody溴酸
氨力农(标准品)GFAP (D1F4Q) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)溴磺
角叉菜胶;卡拉胶Ingrin β5 Antibody硝基-甲
牛磺胆酸-硫酸酯二钠盐TRAF1 (1F3) Rat mAb红色GL/甲基-2-
FLAG peptideIngrin αV Antibody基三基化
十一酸锌Ingrin αV Antibody2,二甲氧基嘧啶-5-酸
硫代酸钠TRAF2 Antibody溴-甲
羽扇豆鹼(标准品)TRAF2 Antibody异抗坏血酸
普卢利沙星;普利沙星XBP-1s (E7M5C) Mouse mAb5--2-甲氧基酸
普卢利沙星;普利沙星(标准品)TRAF1 (45D3) Rabbit mAb2-氟-(三氟甲基)甲
5-HIAA;5-羟基吲哚-酸(血清素代谢物)TRAF1 (45D3) Rabbit mAb2-异基酸
头孢地酸;头孢地酸RACK1 Antibody2-甲基砒啶-酸
鱼过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒Apelin/FITC 荧光素标记脂肪炎症因子ApelinIgG500 ul
鱼果糖1,6-二酸酶ELISA试剂盒Apelin receptor/APJ receptor /FITC 荧光素标记Apelin receptorIgG100 ul
鱼骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒APEX1/Ref-1 /FITC 荧光素标记氧化还原因子1IgG100 ul
鱼谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)ELISA试剂盒APG4B/AUTL1 /FITC 荧光素标记APG4B细胞自噬相关IgG100 ul
鱼睾酮(T)ELISA试剂盒API5/AAC11 /FITC 荧光素标记凋亡抑制因子5IgG20 ul
鱼肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒APNG/MPG/FITC 荧光素标记N-甲基嘌呤DNA糖基化酶IgG100 ul
鱼钙调酸酶(CaN)ELISA试剂盒apoA1/FITC 荧光素标记载脂蛋白A1IgG300 ul
鱼酚氧化酶(PO)ELISA试剂盒ApoB/FITC 荧光素标记载脂蛋白BIgG100 ul
鱼多巴(DA)ELISA试剂盒apo-D /FITC 荧光素标记载脂蛋白DIgG100 ul
小反刍兽疫病毒(PPRV)核酸试剂盒价格多能发育相关基因4抗体2-Ami-4-methoxybenzothiazole中文名:2-氨基-4-甲氧基苯并噻唑别名:分子式:C8H8N2OS
无精症缺失基因4抗体4-Ami-N-methylbenzamide中文名:4-氨基-N-甲酰胺别名:分子式:C8H10N2O
自然杀伤激活受体相关蛋白DAP12抗体6-Amiindole中文名:6-氨基吲哚别名:分子式:C8H8N2
DIP13β抗体8-Ami-2-methylquiline中文名:8-氨基-2-甲基喹啉别名:分子式:C10H10N2
胎盘和前列腺相关蛋白DLG5抗体6-Ami-2-methylquiline中文名:6-氨基-2-甲基喹啉别名:分子式:C10H10N2
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。