牛腺病毒型（BAV-）核酸试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
2'-脱氧-2',2'-二氟尿嘧啶核苷DKK2 (N70) Antibody邻甲磺酰

米卡芬净钠SFRP1 Antibody2-氨基磺酸

羊藿次苷F2TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)二二硫

2,6-二并恶唑 Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb二基重氮

多韦替尼Akt (pan) (C67E7) Rabbit mAb2--5-氟-吡啶

酰黄芪皂苷IAkt (pan) (C67E7) Rabbit mAb氨基-5-溴-2-甲氧基吡啶

5-基-2,戊二酸(标准品)Phospho-YAP (Ser109) AntibodyN-Boc-(S)-甲酸哌啶

醋酸布舍瑞林BMP7 Antibody(±)苄基氧基羰基-a-膦酰甘氨酸*酯

司骨化MEK1/2 (L38C12) Mouse mAb2,5-二特丁基对二酚

25-羟麦角甾p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb3,5-双(三氟甲基)肼

甲酸阿格列汀p44/42 MAPK (Erk1/2) (137F5) Rabbit mAb氨基四

利拉鲁肽p44/42 MAPK (Erk1/2) (L34F12) Mouse mAb2-氟-甲

MK4827 (Niraparib)Human BMP-22-溴-6-氟

S-2-羟基戊二酸hnRNP K (A222) Antibody(溴甲基)三氟酸

去氮腺嘌呤TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 594 Conjuga)2,5-二异烟酸

氧代维甲酰酚Ingrin β3 Antibody依达拉奉

氨基-1-戊Phospho-Glycogen Synthase (Ser641) (D4H1B) XP® Rabbit mAb-基吡啶

2,5-二溴甲酸 Phospho-Glycogen Synthase (Ser641) (D4H1B) XP® Rabbit mAb三异基硅基炔

鱼类促性腺激素释放激素(GnRH)ELISA试剂盒ANXA1(Annexin A1)/FITC  荧光素标记膜粘连蛋白A1IgG100 ul

鱼类超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒AP/ALP/FITC   荧光素标记抗性酸酶IgG20 ul

鱼类白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒beta Adaptin/AP2/FITC  荧光素标记衔接蛋白βIgG100 ul

鱼巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)ELISA试剂盒 Gamma-Adaptin/FITC  荧光素标记衔接蛋白γIgG100 ul

鱼金属硫蛋白2(MT-2)ELISA试剂盒AP2 alpha/FITC  荧光素标记转录激活蛋白2αIgG100 ul

鱼金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒alpha Adaptin/FITC  荧光素标记衔接蛋白1IgG20 ul

鱼黄体生成素(LH)ELISA试剂盒Apaf-1 /FITC  荧光素标记凋亡蛋白活性因子-1（C端）IgG100 ul

鱼红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒Apaf-1/FITC  荧光素标记凋亡蛋白活性因子-1（N端）IgG20 ul

鱼黑色素ELISA试剂盒Proin C/FITC  荧光素标记APC活化蛋白CIgG100 ul
牛腺病毒型(BAV-)核酸试剂盒规格FAM104B蛋白抗体Repaglinide ethyl ester中文名：别名：分子式：C29H40N2O4

FRMD5蛋白抗体3-Ethoxy-4-ethoxycarbonyl phenylacetic acid中文名：别名：分子式：C13H16O5

FRMD6蛋白抗体Repaglinide中文名：瑞格列奈别名：分子式：Repaglinide

FRMD8蛋白抗体3-Ami-2,6-piperidinedione hydrochloride中文名：别名：分子式：C5H9ClN2O2

凝血因子VIIMethyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate中文名：别名：分子式：Methyl 2-bromomethyl-3-nitrobenzoate
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。