牛细小病毒（BPV）核酸试剂盒说明书

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
头孢噻肟钠,噻孢霉素,头孢霉素,先锋霉素IhnRNP K (R332) Antibody环己酮羧酸

头孢噻肟钠(标准品)AMPA Receptor 3 (GluA 3) (D47E3) Rabbit mAb5--2-嘧啶

VX11eAMPA Receptor 3 (GluA 3) (D47E3) Rabbit mAb3,二氟肼盐酸盐,98%

阿格列汀;阿洛利停KEAP1 (P586) Antibody-2-

莪术(标准品)PKCβ (D3E7O) Rabbit mAb甲酰

BYL719BMP4 (6B7) Mouse mAb5-甲基-2-硝基三氟甲

BYL719TLE1/2/3/4 AntibodyL-(+)-阿拉伯糖

A66,p110α抑制剂Mad-1 Antibody甲磺酰基肼盐酸盐

SC-514;IKK-2抑制剂PRDX2 Antibody3,5-二甲氧基溴苄

庚酮Akt (pan) (11E7) Rabbit mAb叶酸

γ-环糊精 MYST1 (D5T3R) Rabbit mAb1-萘甲酰

甲基倍他环糊精,2,6-二甲基-β-环糊精Mono-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D9J1D) Rabbit mAb (PE Conjuga)木糖

埃博霉素B；帕土匹龙Chronophin/PDXP (C85E3) Rabbit mAb2,4,6-三酚

BMS-345541Chronophin/PDXP (C85E3) Rabbit mAb5-溴-2-羟甲基吡啶

IKK-16,选择性IKK抑制剂DKK1 Antibody糠酸

曲格列汀琥珀酸盐 cdc25C (5H9) Rabbit mAb3,5-二溴-氨基三氟甲氧基

2-[2-(2-t-Boc-氨基氧基)氧基]cdc25C (5H9) Rabbit mAb邻氨基三氟甲

2,8-二甲基-2,3,4,4a,5,9b-六氢-1H-吡啶并[4,b]吲哚Granzyme B (D6E9W) Rabbit mAb2-叔丁基酚

鱼免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒Annexin II/FITC  荧光素标记膜粘连蛋白-2IgG20 ul

鱼卵泡刺激素(FSH)ELISA试剂盒Annexin III /FITC  荧光素标记膜粘连蛋白 ⅢIgG100 ul

鱼卵黄高蛋白(PV)ELISA试剂盒Annexin IV /FITC  荧光素标记膜粘连蛋白 ⅣIgG100 ul

鱼酸酮酸羧激酶,线粒体(PCK2)ELISA试剂盒Annexin V/FITC  荧光素标记重组膜粘连蛋白-5()IgG100 ul

鱼酸酮酸羧激酶,细胞质基质[GTP](PCK1)ELISA试剂盒Annexin VI/FITC  荧光素标记膜粘连蛋白 VIIgG20 ul

鱼酸化酰辅酶A羧化酶(pACCase)ELISA试剂盒Anopheles sphensi proin 1/FITC  荧光素标记按蚊IgG100 ul

鱼酸果糖激酶(PFK)ELISA试剂盒ANP/FITC  荧光素标记抗心钠肽（心钠素）IgG20 ul

鱼类*状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒Anthrax/FITC  荧光素标记IgG100 ul

鱼类甲状腺素(T4)ELISA试剂盒Anthrax/FITC  荧光素标记（采用活疫苗制备）IgG20 ul
牛细小病毒（BPV）核酸试剂盒说明书纤维调节蛋白抗体3-Allylrhodanine中文名：3-烯丙基罗丹宁别名：分子式：C6H7S2

富含亮氨酸跨膜纤连蛋白1抗体Nandrolone laurate中文名：月桂酸诺龙别名：分子式：C30H48O3

富含亮氨酸跨膜纤连蛋白2抗体Androst-5-ene-3β,17β-diol 3,17-diacetate中文名：雄甾-5-烯-3β,17β-二醇 3,17-二乙酸酯别名：分子式：C23H34O4

富含亮氨酸跨膜纤连蛋白3抗体Androstalone heptaate中文名：雄诺龙庚酸酯别名：分子式：C26H42O3

FAM65B蛋白抗体11α-Hydroxyandrost-4-ene-3,17-dione中文名：11α-羟基-雄甾-4-烯-3,17-二酮别名：分子式：C19H26O3