猪水疱性口炎（VSV）核酸试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
靛蓝二磺酸钠ATP2A1/SERCA1 (L24) Antibody羟基-甲酸

变色酸钠,铬变酸二钠HMGCS1 (D1Q9D) Rabbit mAb氟-三氟酚

溴百里酚蓝钠盐Phospho-Tie2 (Tyr992) Antibody衣康酸二甲酯

特地唑游离CDC37 (D28H7) Rabbit mAbN,N-二酰

水合;三Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb (Human Specific)聚氧氢化蓖麻油

对二甲氨基甲 (DMAB)Bcl-2 (D55G8) Rabbit mAb (Human Specific)2-基呋喃

特地唑;特地唑酸酯Tie2 (AB33) Mouse mAb硅藻土

酚红钠盐Phospho-Tie2 (Ser1119) Antibody氧基椰油烷基

甲基-2-并噻唑酮腙盐酸盐，水合β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)N,N'-二甲基-1,2-环己二

赤藓红;赤藓红B钠盐Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody顺式-羟基-L-脯氨酸

达拉菲尼,达帕菲尼Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody3,5-二溴甲酸

安赛蜜；AK糖Phospho-PI3 Kinase p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) Antibody甲酸甲酯

酰柠檬酸三丁酯NaPi2b/SLC34A2 (D6W2G) Rabbit mAbSOLUTOL HS 15

酰柠檬酸三酯Dexras1 Antibody2-溴-4'-酮

海藻酸nNOS (C7D7) Rabbit mAb对溴甲酸甲酯

维生素C棕榈酸酯/L-抗坏血酸棕榈酸酯EI24 (D3F6Z) Rabbit mAb氨基甲酸甲酯

阿斯巴甜Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)对甲酸甲酯

克拉维酸Fas (C18C12) Rabbit mAb肼基甲酸

20S蛋白酶体(20SP)ELISA试剂盒PROK1/PRK1/EG-VEGF  内分泌腺衍生血管内皮生长因子100 ul

2,3-二酸甘油酸(2,3-DPG)ELISA试剂盒Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816)  酸化内分泌腺衍生血管内皮生长因子100 ul

Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒VEGF-C  血管内皮生长因子C型100 ul

Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)ELISA试剂盒VEGFB  血管内皮生长因子B300 ul

Ⅰ型前胶原C末端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒VEGF-D  血管内皮生长因子D型100 ul

Ⅰ型前胶原(PCⅠ)ELISA试剂盒VEGFR1  血管内皮生长因子受体120 ul

Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒VEGF Receptor 2/VEGFR2  血管内皮生长因子受体2100 ul

Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒phospho-VEGF receptor 2 (Tyr951)  酸化血管内皮生长因子受体220 ul

Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA试剂盒phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1059)  酸化血管内皮生长因子受体2100 ul
猪水疱性口炎(VSV)核酸试剂盒说明书生长激素释放激素同源盒蛋白1抗体Oleandrin中文名：别名：分子式：C32H48O9

特异性囊肿病液体蛋白15β-Anhydrouzarigenin中文名：别名：β-Anhydroepidigitoxigenin分子式：C23H32O3

眼发育相关基因蛋白ODAG抗体Tenacigenin B中文名：别名：分子式：C21H32O5

腺苷酸环化酶Gα蛋白/Gαs/olf抗体Uzarigenin中文名：别名：Odorigenin B分子式：C23H34O4

谷氨酸受体红藻氨酸离子2/谷氨酸受体6抗体Odoroside H中文名：别名：Digitoxigenin digitaloside分子式：C30H46O8