鸭特定基因序列PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
二(分析标准品,用于环境分析,≥99.99%(GC))Phospho-Ezh2 (Thr311) Antibody式碳酸锌

1,二氧六环(分析标准品,≥99.9%(GC))Oct-4 (V241) Antibody泰妙菌素

-1,2-标准溶液(1000μg/g,基体：酸酯)Adiponectin (C45B10) Rabbit mAb(+)-灰黄霉素

环己(分析标准品，≥99.7% (GC))Adiponectin (C45B10) Rabbit mAb3,二氧噻吩

9,10-二甲基蒽(标准品)XBP-1s (E8C2Z) Mouse mAb铝镍合金

3,5-二酚(标准品)ATR Antibody环基酸频哪酯

二环己(分析标准品,>99.5%(GC))Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) Antibody炔

二并噻吩(标准品)Tyrosine Hydroxylase Antibody基酸

9,10-二基蒽(标准品)AMPKα (F6) Mouse mAb二茂铁甲酸

反式-1,2-二(标准品)SCD1 (C12H5) Rabbit mAb叶黄素

3,二氨(标准品)AMPKα1 AntibodyD-2,二氨基丁酸

2,二酚(标准品)AMPKα1 Antibody T

2,5-二酚(标准品)Lyn (C13F9) Rabbit mAb沃来西脱蓝B

3,二酚(标准品)Lyn (C13F9) Rabbit mAb溴-2-氟吡啶

3,5-二酚(标准品)ERp72 Antibody甲硫基酸

对二甲酸二甲酯(标准品)Claspin Antibody甲氧基-氟甲

邻二甲酸二异酯(标准品)PRSS15/LONP1 (D8W1J) Rabbit mAbBOC-D-4,4'-二基

硫(分析标准品,>99%(GC）)Survivin (6E4) Mouse mAb三氟酸

犬α1微球蛋白(α1-MG)ELISA试剂盒NR2D/NMDAR2D  谷氨酸受体2D200 ul

犬α-1/2干扰素(IFN-α1/2)ELISA试剂盒N-Ras  原癌基因100 ul

犬S100钙结合蛋白A12/钙粒蛋白C(S100A12)ELISA试剂盒NR1D1/REV-ERB alpha  细胞核受体Rev-Erbα100 ul

犬S100B蛋白(S100B)ELISA试剂盒Phospho-REV-ERB alpha (Ser55/59)  酸化细胞核受体Rev-Erbα100 ul

犬P选择素(SELP)ELISA试剂盒Nrf2  核因子2相关因子2100 ul

犬P物质受体(TACR1)ELISA试剂盒phospho-Nrf2 (Ser40)  酸化核因子2相关因子2(Ser40)100 ul

犬N-酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA试剂盒NRF-1  核呼吸因子-1100 ul

犬N端前心钠肽(NT-ProANP)ELISA试剂盒CD303/BDCA-2  C型凝集素结构域家族4成员C100 ul

犬N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒CD304/Neuropilin-1  神经纤毛蛋白-1100 ul
鸭特定基因序列PCR检测试剂盒说明书兔粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA Kit *

兔淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit lymphocyte function associated antigen 3,LFA-3 ELISA Kit 进口/原装

兔内皮型一氧化氮合成酶(eS)ELISA试剂盒 英文名称：Rabbit Endothelial nitric oxide synthase,eS ELISA Kit 进口/原装

兔尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit urokinase plasmigen activator,uPA ELISA Kit *

兔尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)ELISA试剂盒 英文名称：Rabbit Urokinase-type Plasmigen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA Kit *

兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISA试剂盒英文名称：Rabbit prothrombin fragment 1+2,F1+2 ELISA Kit 进口/原装小鼠心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠腺病毒（ADV）ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠纤维蛋白肽B（FPB）ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)ELISA试剂盒      组装/原装         
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。