人核糖核酸酶P基因PCR测定试剂盒规格

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
利谷隆（标准品）CDC20 (D6C2Q) Rabbit mAb(三氟甲基)甲酸酯

灭蚁灵（标准品）Sec61A1 (D4K2Z) Rabbit mAb1-(氟基)哌盐酸盐

噻草（标准品）Sec61A1 (D7Q6V) Rabbit mAb2-羟基-溴甲酸

甲磺隆标准溶液（10μg/ml,u=4%）MLLT1/ENL (D9M4B) Rabbit mAb1-苄基-基-基哌啶盐酸盐

四聚（标准品）COBRA1 (D6K9A) Rabbit mAb7-甲基吲哚-甲

异甲草（标准品）BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAb(S)-2,5-二氢-3,6-二甲氧基-2-异基吡

甲霜灵（标准品）BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAbN-羟基脒

标准溶液（100μg/ml,u=4%）MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAb溴-7-氮杂吲哚

标准溶液（1.00mg/ml,基体：甲）MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAb溴-甲氧基

甲氧滴滴涕（标准品）USP9X (D4Y7W) Rabbit mAb6-甲基喹喔啉

甲氧隆（标准品）SimpleChIP® Human 28S rDNA Repeat Primers(溴酰基)吡啶盐

灭草隆（标准品）SF2/ASF (D1N3S) Rabbit mAb5-硝基愈创木酚钠

灭多（标准品）β-Canin (D10A8) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)-6,7-二(2-甲氧基氧基)喹唑啉

烟嘧磺隆（标准品）HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-甲硫基并噻唑

戊硫（标准品）SimpleChIP® Human c-Myc Intron 1 Primers二

甲酸铵（色谱级）Lipin 1 (D2W9G) Rabbit mAb-4'-甲氧基酮

Amberli IR-120阳离子交换树脂（钠型）Thioredoxin 2 (D1C9L) Rabbit mAb4,5-二氨基-1-(2-羟基)吡唑硫酸盐

酸戊酯（标准品）SF2/ASF (D6S7V) Rabbit mAb赖诺普利

垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒Phospho-IKK alpha/beta (Ser176/Ser180)  酸化KB抑制蛋白激酶α/β100 ul

垂草扁桃酸(VMA)ELISA试剂盒phospho-IKB alpha (Ser32/36)  酸化IKB alpha(Ser32/36)100 ul

穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)ELISA试剂盒phospho-IKK beta (Tyr188)  酸化KB抑制蛋白激酶β100 ul

程序性细胞死亡因子4(PDCD4)ELISA试剂盒phospho-IKK beta (Tyr466)  酸化KB抑制蛋白激酶β100 ul

程序性死亡因子配体1(PD-L1/CD274)ELISA试剂盒phospho-IKK beta (Tyr199)  酸化KB抑制蛋白激酶β100 ul

程序性死亡-1(PD-1)ELISA试剂盒phospho-IKK gamma (Ser85)  酸化KB抑制蛋白激酶γ100 ul

成纤维细胞生长因子9(FGF9)ELISA试剂盒phospho-IKK gamma (Ser31)  酸化KB抑制蛋白激酶γ150 mg

成纤维细胞生长因子8(FGF8)ELISA试剂盒phospho-IKK gamma (Ser376)  酸化KB抑制蛋白激酶γ1 mg

成纤维细胞生长因子6(FGF6)ELISA试剂盒IKI3 family proin  拟南芥IKI35 mg
人核糖核酸酶P基因PCR测定试剂盒规格甘氨酸-N-甲基转移酶Baccatin VI中文名：巴卡亭VI别名：分子式：C37H46O14

谷胱甘肽硫转移酶ω1抗体9-Deacetyltaxinine E中文名：别名：分子式：C35H44O9

GATA结合蛋白4抗体Jolkilide A中文名：岩大戟内酯A别名：分子式：C20H26O3

庆大霉素单克隆抗体Taxuspine X中文名：别名：分子式：C41H50O14

甘氨酸受体alpha 1/2/3型抗体Taxuspine B中文名：别名：分子式：C35H42O10