大豆内源基因PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
PMSF叔丁基异硫酸酯  99%氮标准溶液5ng/ml,基体:轻油

Calcium hydrogenphosphate dihydrate巯基乙酸乙酯 98%氮标准溶液10ng/ml,基体:轻油

Calcium carbonate3-巯基酸 98%氮标准溶液50ng/ml,基体:轻油

Calcium oxide巯基乙酸甲酯 96%氮标准溶液100ng/ml,基体:轻油

Calcium fluoride硫代乙酸钠 AR,80.0%氮标准溶液200ng/ml,基体:轻油

Calcium Hydroxide硫代乙酸钠 BR二十八烷 standard for GC, ≥98.5% (GC)

Calcium hypophosphite硫代乙酸钠 98%丽春红S Biological stain

Calcium hypophosphite mohydrate松油,异构体混合物,CP炔 Standard for GC（）

Acid calcium phosphate硬酯酸乙酯 97%胡椒 CP,99.0%（易制）

Calcigel simple油酸甲酯 CP，≥60.0% (GC)聚乙二400 色谱固定液，60℃+++++

Calcium pyrophosphate油酸甲酯 分析标准品，>99.0%(GC)罗丹明B AR

Calcium silicate油酸甲酯 99%癸二酸 色谱固定液，155℃

Calcium acetate mohydrate油酸甲酯 96%无碳酸钠 AR

Glycerol phosphate calcium salt油酸甲酯 Standard for GC,≥99%(GC)司班60 色谱固定液

Calcium oxalate异抗坏血酸钠 98%硫标准溶液 轻质矿物油中硫标准品，100ng/ml

Calcium stearate4-(2-氨乙基)苯磺酰胺  99%硫标准溶液 1000ug/ml，基体:1%HCl

1-十四烯(>99.5%(GC),标准物质)Snail (L70G2) Mouse mAbKidins220  220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体

1-十五烯(>99.0%(GC)，标准物质)Human Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF)KIAA1576/VAT1L  囊泡胺转运蛋白1家族蛋白抗体

1-十六烯(>99.5%(GC),标准物质)PARN (P620) AntibodyKIAA1522  KIAA1522蛋白抗体

1-十七烯(>99.5%(GC),标准物质)PTMScan® Lys-C ProteaseKi-67 (Proliferation Marker)  Ki67蛋白抗体

1-十九烯(>99.5%(GC),标准物质)Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype ControlKGF/FGF7  纤维母细胞生长因子7抗体

4-溴苯乙酰溴(>99.0%(T),用于高效液相色谱标记)Phospho-Bcr (Tyr177) AntibodyKF1/ZFP103  锌指蛋白103抗体

N-氯甲基-4-硝基邻苯二甲酰亚胺(>98.0%(T))Bcr AntibodyKetohexokinase  肝果糖激酶抗体

N-氯甲基-4-硝基邻苯二甲酰亚胺(>98.0%(T))Acetyl-Histone H3 (Lys27) (D5E4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)Keratocan  细胞角膜蛋白多糖抗体

3'-甲氧基苯乙酰溴(>99.0%(T))VCAM-1 (D8U5V) Rabbit mAb (Mouse Specific)Keratan Sulfate  硫酸角质素抗体

N,N'-二异基-O-(4-甲基)异脲(>95.0%(HPLC))Gα(z) AntibodyKEAP1/KLHL19  胞质接头蛋白Keap1抗体
大豆内源基因PCR检测试剂盒说明书人制瘤素M受体(OSMR)ELISA试剂盒英文名称：human oncostatin M receptor,OSMR ELISA Kit*

人中期因子(MK)ELISA试剂盒英文名称：Human Midkine，MK ELISA Kit进口/分装

人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA试剂盒英文名称：Human neutrophil elastase,NE ELISA Kit*

人中性粒细胞防御素1-3(HNP1-3)ELISA试剂盒英文名称：Human neutrophil peptide 1-3,HNP1-3 ELISA Kit进口/分装

人中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)ELISA试剂盒英文名称：Human neutrophilic alkaline phosphatase,NAP ELISA Kit进口/原装

人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒英文名称：Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA Kit*小鼠上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠上腺素能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠上腺素(E)ELISA试剂盒      组装/原装

小鼠神经营养因子4(-4)ELISA试剂盒      组装/原装         
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。