单纯疱疹病毒PCR检测试剂盒说明书

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
Oxalic acid dihydrate硫酸新霉素 USP级,680 I.U./mg砜 AR,99%

Tannic acid盐酸土霉素 95%硫脲 CP，98%

Molybdic acid利福平  97%卵磷脂 from soybean,>90%

 Silicic acid硫酸链霉素 720 I.U./mg5,10,15,20-四(4-吡啶基)卟啉 97%

Silicotungstic acid hydrate无柠檬酸 AR, ≥99.5% (T)苯酞 99%

Tungstic acid柠檬酸,一  AR,99.5%2-溴-3-甲基丁酸 98%

2-Butynedioic acid柠檬酸 AR,99.5%氯化磷酰胆碱钙盐，四 98%

α-Bromoisobutyric acid氮化铝 N >33.0%， D50/2.0 μmD-果糖-1，6-二磷酸三钠盐,无 98%

Chrysophanic acid氮化铝 N >32.5 % ，D97/5.0 μm磷酸吡哆 98%

Cinnamic acid氮化 1 μm, 98.5%磷酸吡哆 98%，用于细胞培养

Citrazinic acid六方氮化 99.9% metals basis,1～2μm5’-磷酸吡哆,一 98%

Tricyanic acid氮化硅 α-phase,92%,325 mesh吡哆胺 98%

1,1-Cyclobutanedicarboxylic acid氮化硅 β-phase,95%,1-3μm盐酸吡哆 99%

trans-Ferulic acid碳化钛 99%,2-4μm对硝基氯苯 GR，99.5%

Ferulic acid氮化钛 99.5%,2-10 μm2,4-二硝基氯苯 GR,99%（）

Heptadecaic acid碳氮化钛 powder, 1-2 μm, 99%2-萘胺-1-磺酸 98%

邻苯二甲(>99.0%(GC))CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAbKBTBD4  BTB-kelch蛋白家族4抗体

2-氨基吡啶(>99.0%(GC)(T))CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAbKBTBD10  BTB-kelch蛋白家族10抗体

2-氨基苯硫酚(>95.0%(T))Rab3A AntibodyKBP  KBP蛋白抗体

丹磺酰肼(>95.0%(HPLC)(T))SirT1 (D60E1) Rabbit mAb (Mouse Specific)Kazrin  Kazrin蛋白抗体

DBD-H [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,3-苯并恶二唑(>98.0%(HPLC))Vimentin (R28) AntibodyKATNA1/Katanin p60 A1  剑蛋白p60亚基A1抗体

NBD-H (=4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑肼)(>98.0%(HPLC))Ubiquitin Antibodykatanin p80  剑蛋白p80抗体

1,3-环己二酮(>98.0%(GC)(T))PHF20 (D96F6) XP® Rabbit mAbKAT4  细胞周期基因1蛋白抗体

ABD-F[=4-(氨磺酰)-7-氟-2,1,3-苯并恶二唑](>98.0%(N)(T))Phospho-Tau (Ser202) (D4H7E) Rabbit mAbKAT3B/Ep300  转录接头蛋白EP300抗体

二茂铁乙酸(>97.0%(GC))Phospho-Keratin 20 (Ser13) (D9M6O) Rabbit mAbKAT2B/ GCN5/PCAF  组蛋白乙酰转移酶PCAF抗体

(肼基羰基)二茂铁(>95.0%(HPLC)(T),用于高效液相色谱标记)HMGB1 AntibodyKAT13D/CLOCK  生物钟KAT13D蛋白抗体
单纯疱疹病毒PCR检测试剂盒说明书G蛋白偶联受体GPR10蛋白抗体2',3'-Di-O-acetyl-5'-deoxy-5-fluorocytidine中文名：别名：分子式：C13H16FN3O6

G蛋白偶联受体C5L2蛋白抗体Capecitabine中文名：卡培他滨别名：分子式：C15H22FN3O6

G蛋白偶联受体EX33蛋白抗体4-(N-Methyl)-amiantipyrine中文名：别名：分子式：C12H15N3O

G蛋白偶联受体GPR102蛋白抗体Valsartan methyl ester中文名：别名：分子式：C25H31N5O3

G蛋白偶联受体GPR37样蛋白1抗体α-D-Glucose中文名：α-D-葡萄糖别名：分子式：C6H12O6