黄热病病毒PCR检测试剂盒厂家

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
AIBID-别异亮氨酸 98%0.95

AIPFmoc-Ile-OPfp 98%黄豆苷 分析标准品，≥96%

ACVAH-Ile-2-Chlorotrityl Resin 0.3~0.8 mmol/g, 100~200 mesh黄豆苷 95%

AIBMEFmoc-Ile-Wang resin 100-200 mesh, Substitution 0.3-0.8mmol/g2,6-二氯-3-硝基吡啶 97%

AzodicarbonamideFmoc-D-Ile-Wang resin 100-200mesh, Substitution 0.3-0.8mmol/二氢辣椒碱 分析标准品

Span 20L-异亮氨 97%二氢辣椒碱 90%

Span 400.3~0.8mmol/g, 100~200 mesh, 1% DVB(-)-表没食子酸儿茶素 ≥98% (HPLC)

Span 60肯普肽 ≥95% (HPLC)(-)-表没食子酸儿茶素 分析标准品，≥98%

Span 80Kinetensin ≥97% (HPLC)大黄素 ≥90% (HPLC)

Span 85L-赖氨酸乙酯 98%表儿茶素 分析标准品，≥98%

BBOTL-赖氨酸甲酯盐酸盐 98%秦皮甲素 99%

BOP ReagentN-碳苄氧基赖氨酸 98%(-)-表没食子儿茶素没食子酸酯 分析标准品,≥98%

HDBACL-亮氨酸甲酯盐酸盐 98%丁香酚 99%

Benzyldodecyldimethylammonium bromideD-赖氨酸盐酸盐 98%表告依春  98%

Benzethonium chlorideD-亮氨酸 99%阿魏酸 99%

SB3-12N(e)-Boc-L-赖氨酸 97%漆黄素 分析标准品，≥98%

癸二酸二乙酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC))LATS1 (C66B5) Rabbit mAbMIP2/GRO Beta/CXCL2  巨噬细胞炎症蛋白2（ GRＯβ）抗体

2,4-二氯苯酚(standard for GC,≥99.5%(GC))LATS1 (C66B5) Rabbit mAbMIP-1 Beta/CCL4  巨噬细胞炎症因子1β 抗体 MIP-1β

二乙二单甲(standard for GC)Pan-Keratin (C11) Mouse mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)MIP-1 Alpha  巨噬细胞炎症因子1α抗体 MIP-1α

二乙二乙(Standard for GC, ≥99.5% (GC))Pyk2 (5E2) Mouse mAbMimitin  MYC诱导线粒体蛋白抗体

对二氯苯(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Ephrin B (Tyr324/329) AntibodyMIIP  IGFBP2结合蛋白/迁移和侵润抑制蛋白抗体

二十二烷(standard for GC,≥99.0%(GC))Rat (LTF-2) mAb IgG2b Isotype Control (APC Conjugate)MIG7  富含半胱氨酸蛋白质MIG7抗体

三十二烷(standard for GC,≥98.0%(GC))Phospho-LKB1 (Ser428) (C67A3) Rabbit mAbMIG6/ERRFI1  有丝分裂原诱导基因6抗体

正癸烷(standard for GC,≥99.5%(GC))DUSP10/MKP5 AntibodyMIF  巨噬细胞移动抑制因子抗体

1,1-二氯乙烷(Standard for GC,≥99.5%(GC))TRPV3 AntibodyMIER2  中胚层诱导早期反应蛋白2抗体

2，2-二甲基丁烷(Standard for GC,≥99.5%(GC))SLFN11 (D8W1B) Rabbit mAbMidlin isoform Protein 1  中脑核仁蛋白1抗体
黄热病病毒PCR检测试剂盒厂家巨细胞病毒UL49蛋白抗体7α,15-Dihydroxydehydroabietic acid中文名：别名：分子式：C20H28O4

类白细胞抗原A抗体Pinusolide中文名：别名：分子式：C21H30O4

羟类固醇脱氢酶17β2抗体9-Deacetyl-9-benzoyl-10-debenzoyltaxchinin A中文名：别名：分子式：C31H40O10

三羟基*基辅酶A合成酶2抗体Triptoquinide中文名：别名：分子式：C20H22O4

羟类固醇脱氢酶17β-HSD抗体ent-6α,9α-Dihydroxy-15-oxokaur-16-en-19-oic acid中文名：别名：分子式：C20H28O5
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。