班氏丝虫PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Fast red B salt 1,5-NaphthalenedisulfonateFMOC-甘氨 99%二甲基亚砜 ACS，光谱级

Hydroxynaphthol blue(s)-N-FMOC基苯氨  98.5%二甲基亚砜 农残级

Lignin alkalie2-(N-Fmoc)-氨基-1,3-丁二  98.5%二甲基砜 99%

Thiazole OrangeFmoc-缬氨 98.5%二甲基砜 核磁共振定量标准品

AMACFmoc-D-丝氨酸 BR2-巯基烟酸 99%

ATA芴甲氧羰酰基-6-氨基己酸 98%叔戊 98.0%

Thioflavin TFMOC-哌啶-4-甲酸 97%2,5-二甲基-2,5-己二 99%

Thioflavine SN'-芴甲氧羰基-N-苄氧羰基-L-赖氨酸 98.0%2,5-二甲基-3-己炔-2,5-二 99%

β-Naphthol VioletN-alpha-芴甲氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-D-色氨酸 97%3-甲基-3-戊 98%

VCFLAG® Peptide2-甲基-3--2- 98%

Sodium ascorbate纤维蛋白肽 B 人类 ≥97% (HPLC)3-甲基-1-戊炔-3- 98%

β-carotene甘氨酸-L-亮氨酸 98%2-甲基-3-丁炔-2- 98%

D-BiotinD-谷氨酸 98%羟基乙叉二膦酸 60%溶液

NHS-BiotinL-谷氨酸-5-叔丁酯-1-甲酯盐酸盐 95%氨基三亚甲基膦酸 50%溶液

VA甘氨酸苄酯盐酸盐 98%固体亚磷酸 99.97% metals basis

Vitamin A palmitate甘氨酸苄酯对甲苯磺酸盐 98%四甲基氢氧化铵 AR,25%甲溶液

泛酸钙一合物(标准品)Cytokine Receptor Common beta-Chain AntibodyMMP-9  基质金属蛋白酶-9抗体

山梨酸(标准品)RECK (D8C7) Rabbit mAbMMP-9  基质金属蛋白酶-9抗体

全氟辛酸(分析标准品, 用于环境分析)Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAbMMP-9  基质金属蛋白酶9抗体

正辛酸(分析标准品,≥99.9%(GC))Hydroxy-HIF-1α (Pro564) (D43B5) XP® Rabbit mAbMMP9  基质金属蛋白酶9抗体

酸(标准品)Flotillin-2 (C42A3) Rabbit mAbMMP-8  基质金属蛋白酶-8抗体

蓖麻油酸(分析标准品,99%)AMPA Receptor 3 (GluA 3) AntibodyMMP-7  基质金属蛋白酶-7抗体

硬脂酸(分析标准品,≥99.5%(GC))Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAbMMP-3  基质金属蛋白酶3抗体

甜蜜素(标准品)Phospho-PDK1 (Ser241) (C49H2) Rabbit mAbMMP-28  基质金属蛋白酶28抗体

L-山梨糖(标准品)tch1 (C37C7) Rabbit mAbMMP-26  基质金属蛋白酶-26抗体

糖精钠 合物(标准品)Chk2 (1C12) Mouse mAbMMP24/ MMP25/MMP21  基质金属蛋白酶-24抗体
班氏丝虫PCR检测试剂盒规格CWC22蛋白抗体查尔酮 查尔酮 查尔酮CAS .：13323-67-6中文名：别名：Butein 4-methyl ether

铜转运蛋白CUTC抗体Echinatin中文名：刺甘草查尔酮别名：分子式：C16H14O4

CUTL1蛋白抗体Picembrin chalcone中文名：松属素查尔酮别名：分子式：C15H12O4

胱氨酸抗体Neohesperidin dihydrochalcone中文名：新橙皮苷二氢查尔酮别名：分子式：C28H36O15

胰凝乳蛋白酶B抗体Asebogenin中文名：别名：分子式：C16H16O5
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。