葡萄状穗霉属通用PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
p-Hydroxy-cinnamic acid3,5-二氯苯酸 98%乙胺 Standard for GC, >99.5% (GC)

p-Hydroxyphenethyl trans-ferulate3,4-二氯苯酸 97%乙胺  重蒸馏, ≥99.5%

Pimentol3,4-二氟苯酸 98%乙胺 99%，细胞培养

Plantamajoside2,3-二氯苯酸 97%乙胺  ACS, ≥99.0%

Poliumoside2,4-二甲氧基苯酸  96%乙二单己 98%

Rosarin4-(二甲基氨甲酰基)苯酸 97%乙二单己 99%

Rosavin4-(二甲基氨基)苯酸 95%乙二丁 AR，99.0%

RosinN,N-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊烷-2-基)苯胺 98间苯二甲酸 AR

Rosmarinic acid4-(二苯基胺基)苯酸 98%丁基锡酸 Sn 56.5%±0.5%

Safrolglycol2,4-二酸 97%甲基异丁酮  for HPLC, ≥99.5%

Salvialic acid A3,4-二酸 98%甲基异丁酮 ACS, ≥98.5%

Salvialic acid B3,5-二甲氧基苯酸 98%甲基异丁酮 >99.5%(GC)

Salvialic acid C4-二苯并呋喃酸 98%甲基异丁酮 CP,98.0%

Salvialic acid D2,6-二氯吡啶-3-酸 95% 甲基异丁酮 AR,99.0%

Secodihydro-hydramicromelin B2,6-二甲氧基-3-吡啶酸 95% 甲基异丁酮 standard for GC, ≥99.5% (GC)

Sibiricose A53,5-二甲基异唑-4-酸 97%新戊二 99%

溴化铜(>99%,BR)Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) Antibodyphospho-HDAC1(Ser423)  磷酸化组蛋白去乙酰化酶1抗体

柠檬酸铜(>98.5%,BR)Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) Antibodyphospho-GSK-3 Beta(Thr390)  磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗体

氢氧化铜(>96.5%,Tech Grade)Glut4 (1F8) Mouse mAbphospho-GSK-3 Beta(Ser9)  磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗体

草酸铜(>97%,Tech Grade)Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) Antibodyphospho-GSK-3 Beta(Ser21+Ser29)  磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗体

无硫酸铜(>99%,BR)PU.1 (9G7) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)phospho-GSK-3 Beta(Ser21)  磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗体 GSK3α(Phospho-Ser21)

肌酸酐;肌酐S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAbphospho-GSK3 Beta (Tyr216)  磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗体

甲酚紫乙酸盐(>70%,BS)S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAbphospho-GSK3 Alpha/Beta(Tyr279+Tyr216)  磷酸化葡萄糖合成激酶3α/β抗体

酸性猩红7B(>70%,BS)Phospho-EGF Receptor (Tyr1086) AntibodyPhospho-GSK3 alpha(Ser21)  磷酸化葡萄糖合成激酶3α抗体 GSK3α(Phospho-Ser21)

酸性红44(BS)Anisomycinphospho-GSK3 Alpha(Ser21)  磷酸化葡萄糖合成激酶-3α抗体

环胞甙盐酸盐；盐酸环胞苷；安西他滨盐酸盐Caspase-2 (C2) Mouse mAbPhospho-GRM2/GLUR2(Tyr876)  磷酸化促代谢型谷氨酸受体2抗体
葡萄状穗霉属通用PCR检测试剂盒规格小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

小鼠血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR-2/Flk-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

小鼠血管内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3/Flt-4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

小鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

小鼠血管生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

小鼠血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃25毫升

小鼠血管性血友病因子/瑞斯托素辅因子(vWF)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃10毫克

小鼠血红素氧合酶1(HO-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25毫升
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。