鸭疫里默氏杆菌PCR检测试剂盒价格上海联祖生物相关产品:Cox V-IgM检测试剂盒浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 鸭疫里默氏杆菌PCR检测试剂盒价格 |
英文名称 | Riemerella anatipestiferPCR |
货号 | LZP7237 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
N-Phenylurea2,3,6-三氯苯酚 分析标准品N,N-二甲基乙二胺 98%
Potassium benzoate2,3,4-三氯苯酚 分析标准品N,N-二乙基乙二胺 98%
Potassium pyruvate3,4,5-三氯苯酚 分析标准品N,N'-二异基碳二酰亚胺 98%
Sodium 1-propanesulfonate mohydrate蓖麻油 CP叠氮磷酸二苯酯 97%
Sodium 1-propanesulfonate萎锈灵 分析标准品,99.9%N,N-二异基乙二胺 97%
(-)-α-Pinene解毒喹 分析标准品1-(2-二甲基氨基乙基)-1H-5-巯基-四氮唑 98%
β-Pinen炔草酸 分析标准品2,2-二氟-1,3-二甲基-咪唑烷 97%
Sele-DL-methionine5-氯-8-羟基喹啉 97%1-乙基-(3-二甲基氨基基)碳二亚胺盐酸盐 98.5%
Semicarbazide2,3-二氟-5-氯吡啶 98%四甲基氟代脲六氟磷酸酯 98%
Sodium benzenesulfonate唑螨酯 分析标准品,99.5%吡啶盐 65 - 70 % (HF)
Sodium decaate2-庚 98%2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 99%
Sodium hydrogen phthalate2-庚 ≥97%,Kosher3-巯基-1,2,4-三唑 97%
Sodium oxamate甲咪唑烟酸 分析标准品三氧化硫-吡啶复合物 97%
Sodium D-pantothenate甲基立枯磷 分析标准品,98%四丁基氟化铵,三 90%
Sodium periodate双组份无吡啶滴定剂 5mg/ml,测含量较高样品。 2瓶500毫升为L-茶氨酸 98%
Sodium phenylpyruvate双组份无吡啶滴定剂 3mg/ml,测常规样品L-茶氨酸 99%
Bis-Tris;双(2-羟乙基)氨基(三羟甲基)S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAb (HRP Conjugate)phospho-VEGFR2 (Tyr1175) 磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
琼脂糖(Sigma)ELL (D7N6U) Rabbit mAbphospho-VEGF receptor 2(Tyr1214) 磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
植物血凝素E-Cadherin (4A2) Mouse mAbphospho-VEGF receptor 2 (Tyr996) 磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
50% 戊二溶液Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (HRP Conjugate)phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1059) 磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
6-糠基氨基嘌呤,激动素Aurora A (D3E4Q) Rabbit mAbphospho-VAV3(Tyr173) 磷酸化鸟嘌呤核苷酸交换因子VAV3抗体
乙二双(2-氨基乙基)四乙酸Aurora A (D3E4Q) Rabbit mAbphospho-VAV1(Tyr174) 磷酸化鸟苷酸转换因子VAV1抗体
无磷酸二氢钠(分子生物学级)Actamin 1 (D1M9Q) Rabbit mAbphospho-VAV1(Tyr160) 磷酸化鸟苷酸转换因子VAV1抗体
月桂酰基肌氨酸钠(分子生物学级)PTMScan® Pilot Phospho-Tyrosine Rabbit mAb (P-Tyr-1000) KitPhospho-VASP(Ser239) 磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体
硫酸镍六CYR61 (D4H5D) XP® Rabbit mAbPhospho-VASP(Ser157) 磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体
乙酸铵(分子生物学级)CYR61 (D4H5D) XP® Rabbit mAbPhospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser40) 磷酸化酪氨酸羟化酶抗体
鸭疫里默氏杆菌PCR检测试剂盒价格兔主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:500克
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