神经肉孢子虫PCR检测试剂盒厂家

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
Ginseside Rh41-溴-3-甲基-2- 93%醋酸棉酚 98%（HPLC)

Ginseside Rk21,3-酮二羧酸二乙酯 95%正丁 99%

Ginseside Rk13-溴酸乙酯 98%正丁 ≥99.5%(GC)

Ginseside Rk3乙酸 98%,无正丁 GCS，≥99.7% (GC)

Ginseside Ro4-苯甲酸甲酯 98%正戊烷 AR,99%

Ginseside Rs34- 98%硫代乙酰胺 AR,99%

Glaucin B4-甲氧基-3,5-二甲基-2-羟甲基吡啶 98%硫代乙酰胺 ACS, ≥99.0%

Glochidiol异硫酸甲酯 98%DL-乳酸 药用级

Glochidone4-硝基吡啶-N-氧化物 98.0 %L-乳酸溶液 60%溶液

Glochidol噻吩甲酰三氟酮 98.0%L-乳酸钠  AR，60%溶液

GlutineCH948B除湿机 除湿量48L/DDL-乳酸钠 60%溶液

Glycoside L-F2对甲苯磺酸,— AR，99%联苯 ≥99.5% (GC)

Glycyrrhetic acid 3-O-mo-beta-D-glucuronide对甲苯磺酸,— CP，98%二苯 CP

Glycyrrhetinic acid对甲苯磺酸,— ACS,≥98.5%对三联苯 99%

Glycyrrhizic acid ammonium salt对乙酮 97%间三联苯 98%

Glycyrrhizic acid3,5-二氨基苯甲酸 98%间三联苯 分析标准品，用于环境分析, ≥99.5% (GC)

4(5)-甲基咪唑(>98%,BR)CD28 (CD28.2) Mouse mAb (FITC Conjugate)Phospho-p70 S6 Kinase Beta (Thr228)  磷酸化核糖体S6蛋白激酶β2抗体

4-氯苯氧基乙酸钠(>98%,植物激素级)c-Jun (60A8) Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-P70 S6 Kinase beta (Ser371)  磷酸化核糖体S6蛋白激酶抗体

氢氧化铝(>98%,BR)SV40 Large T Antigen (D1E9E) Rabbit mAbPhospho-p63 (Ser455)  磷酸化P63肿瘤抑制基因抗体

磷酸铵三(>98%,BR)Ikaros (D6N9Y) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)Phospho-p63 (Ser395)  磷酸化P63肿瘤抑制基因抗体

碳酸钡(>99%,BR)RIP3 (D8J3L) Rabbit mAbPhospho-p63 (Ser160/Ser162)  磷酸化P63肿瘤抑制基因抗体

苯甲酰胺(>98%,BR)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjugate)Phospho-p57 Kip2 (Thr310)  磷酸化周期蛋白依赖激酶抑制因子1C抗体

比布里希猩红(>90%,BS)FastScan™ Total Akt1 ELISA KitPhospho-p56Dok2(Tyr351)  磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白2抗体

柠檬酸钙；柠檬酸钙四MHC Class II (I-A/I-E) (M5/114.15.2) Rat mAb (PerCP-Cy5.5® Conjugate)Phospho-p56Dok2(Tyr299)  磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白2抗体

硫酸铯(分子生物学级)CD99 AntibodyPhospho-p56Dok2(Tyr142)  磷酸化D酪氨酸激酶衰减蛋白2抗体

铜片Phospho-SQSTM1/p62 (Ser349) (E7M1A) Rabbit mAbphospho-p53BP1(Ser25/29)  磷酸化p53结合蛋白1抗体
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