肯塔基沙门氏菌PCR检测试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
24-r-hopa-4(23),22(29)-diene-3β,6β-diol邻基-β-D-吡喃葡萄糖苷 99%β-胡萝卜素 96%

(24S)-Cycloartane-3,24,25-triol 24,25-acetonide2-基-β-D-吡喃半乳糖苷 99%，n-animal originβ-胡萝卜素 分析标准品

25-Anhydroalisol F对-α-D-葡萄糖吡喃苷 99%D-泛酸钙 98%

25-Anhydrocimigel 3-O-beta-D-xyloside1-O-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷2,3,4,6-四乙酸盐 98%叶酸 ≥97%(HPLC)

25-Hydroxycycloart-23-en-3-one三-O-乙酰基-D-葡萄烯糖 98%烟酸 99%

25(R)-Hydroxyprotopanaxadiol5-硫代-D-葡萄糖 96%烟酸 分析标准品

25(S)-Hydroxyprotopanaxatriol2,3,4,6-四-O-苄基-D-吡喃半乳糖 98%烟酰胺 99%

25-O-Methylalisol A四乙酰核糖 98%烟酰胺 分析标准品，≥99.8%

25-O-methylcimigel-3-O-beta-D-xylopyraside5-溴-4氯-3吲哚基β-D 半乳糖 99%烟酰胺 ≥99.5% (HPLC)

26-r-8-oxo-alpha-ocerin二巯基 97%烟酰胺  用于细胞和昆虫细胞培养，≥99.5% (HPLC)

27-Hydroxymangiferolic acidL-肾上腺素 98%（）D-泛 98%

27-Hydroxymangiferonic acid重去甲肾上腺素 ≥98%(HPLC),USP核黄素 98%

27-p-Coumaroyloxyursolic acid牛磺酸 99%醋酸维生素A USP/EP

28-Deoxonimbolide牛磺酸 USP级，已通过细胞培养测试醋酸维生素A 细胞培养级

28-Hydroxy-3-oxoolean-12-en-29-oic acid二乙二  >98%(GC)柠檬酸钠，二  AR,99.0%

29-Hydroxyfriedelan-3-one乙二 AR,98%DL-α-酚 96%

锑(> 98%,BR)BRD7 (D9K2T) Rabbit mAb (ChIP Formulated)phospho-RAD51(Thr310)  磷酸化Rad51抗体

结晶碳酸钠(>99%,BR)SimpleChIP® Human CTGF Promoter PrimersPhospho-Rad17 (Ser645)  磷酸化细胞周期检控Rad17蛋白抗体

中性氧化铝(BR)SimpleChIP® Human CTGF Upstream Primersphospho-RACGAP1(Ser387)  磷酸化Rho GTP酶激活蛋白GAP抗体

D-(>99%，BC)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)phospho-RAC1(Ser71)  磷酸化细胞迁移诱导因子5抗体

吲哚(>98%,BR)His-Tag (D3I1O) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)phospho-Rab24(Tyr17)  磷酸化ras基因相关蛋白Rab24抗体

硫酸锂(>98%,BR)Acetyl-Histone H3 (Lys23) (D6Y7M) Rabbit mAbphospho-Rab24(Ser95)  磷酸化ras基因相关蛋白Rab24抗体

硫柳汞钠盐Phospho-Rpb1 CTD (Thr4) Antibodyphospho-Pyk2/PTK2B(Tyr402)  磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗体

硅粉(>99%，BR)AGPAT2 (D8W9B) Rabbit mAbphospho-Pyk2 (Tyr881)  磷酸化富含脯氨酸的酪氨酸激酶2抗体

油酸钠(>98%,BR )Phospho-IKKα/β (Ser176/180) (16A6) Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-PTPRA(Tyr798)  磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗体

四甲基氯化铵(>99%,BR)Malonyl-Lysine [Mal-K] MultiMab™ Rabbit mAb mixphospho-PTPRA(Ser180)  磷酸化酪氨酸磷酸酶α抗体
肯塔基沙门氏菌PCR检测试剂盒说明书小鼠Ⅳ型胶原(ColⅣ)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

小鼠apelin12(AP12)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

小鼠B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃500U

小鼠B因子(BF)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1KU

小鼠CD19分子(CD19)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1KU

小鼠CD30分子(CD30)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：50张/盒

小鼠CD3分子(CD3)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃250U

小鼠c-fosELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃500U