匙状*毛样线虫PCR检测试剂盒价格

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
 L-Ornithine L-aspartate salt大鼠心肌成纤维细胞*培养基质苯胺标样 浓度范围:0.9,2.01(mg/L)，分析标准品

D-Cysteine大鼠主动脉内皮细胞*培养基苯胺 MDI级,≥99.98%(GC)

D-Cysteine hydrochloride mohydrate大鼠主动脉平滑肌细胞*培养基苯乙烯 Standard for GC，>99.5%（GC)

L-Lysine acetate salt大鼠血管外膜成纤维细胞*培养基苯乙烯 CP,含10-15ppm 4-叔-丁基邻苯二酚稳定剂

D-Phenylglycine大鼠大隐静脉平滑肌细胞*培养基苯乙烯 99%,含10-15ppm 4-叔-丁基邻苯二酚稳定剂

DL-rvaline大鼠冠状动脉平滑肌细胞*培养基苯乙烯 分析标准品

L-2-Amibutyric acid大鼠大隐静脉内皮细胞*培养基苯乙烯标准溶液 1000μg/ml，溶剂：二硫化碳

D-2-Amibutyric acid大鼠冠状动脉内皮细胞*培养基苯乙烯标准溶液0.88mg/ml，溶剂:甲

DL-2-Amibutyric acid大鼠骨细胞*培养基苯乙烯标准溶液 1000μg/ml

L-Homophenylalanine大鼠滑膜细胞*培养基甲基叔丁基 色谱级,≥99.9% (GC)

D-Homophenylalanine大鼠骨骼肌细胞*培养基乙基苯 >99.5%(GC)

DL-Homophenylalanine大鼠表皮角化细胞*培养基2-丁酮 ACS, ≥99.0%

L-Homophenylalanine ethyl ester hydrochloride大鼠成纤维细胞*培养基1,2,4-*苯 98%

BOC-L-Homophenylalanine大鼠软骨细胞*培养基2,5-二氯 99%

BOC-D-Homophenylalanine大鼠破骨细胞*培养基降冰片烯二酸酐 99%

Sodium Glycinate大鼠皮肤肥大细胞*培养基降冰片烯二酸酐 95%

盐酸吉西他滨Erdj5/DNAJC10  Erdj5/DNAJC10多肽Synaptotagmin 1/SYT1  突触结合蛋白1抗体

盐酸吉西他滨（标准品）Tie1/JTK14 peptide  上皮生长因子样域酪氨酸激酶1抗原Synaptopodin  突触极蛋白synaptopodin抗体

甲磺酸吉米沙星Tie2(Porcine tyrosine kinase with immuglobulin-like and EGF-like domains 2)  上皮生长因子样域酪氨酸激酶2抗原Synapsin II  神经突触素2抗体

甲磺酸吉米沙星（标准品）Rarres2/TIG2/Chemerin(Retiic acid receptor responder protein 2)  视黄酸受体应答蛋白2抗原SYN1  神经突触素1抗体

胆酸钠TLR3 (Toll-like receptor 3)  Toll样受体3抗原SYK  非受体型酪氨酸蛋白激酶抗体

醋酸胰高血糖素TLR4/CD284 (Toll-like receptor 4)  Toll样受体4抗原SVH/ARMC10  肝癌蛋白剪接变异体蛋白抗体

醋酸戈那瑞林TLR5/CD285 (Toll-like receptor 5)  Toll样受体5抗原sVEGFR2  可溶性血管内皮生长因子受体2抗体

盐酸格拉司琼TM(Thrombomodulin)  血栓调节蛋白多肽SV2A  突触泡蛋白2A抗体

盐酸格拉司琼（标准品）Tn-C(Tenascin-C)C-Terminus  腱糖蛋白-C(固生蛋白)C端抗原SUZ12/CHET9  胚胎干细胞抑制蛋白Suz12抗体

氢氯噻TNF-alpha  肿瘤坏死因子-α抗原Survivin  细胞凋亡抑制因子抗体
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