诺如病毒型PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Pronase E4-雄烯-11β--3,17-二酮2-氯-5-甲酸 99%

Antipain dihydrochloride2,2-双[4-(4-氨基苯氧基)苯基]烷 98%2-氯二苯甲酮 99%

Cholesterol esterase3-溴肉桂酸 98%4-氯-4'-羟基二苯甲酮 98%

Amyloglucosidase from aspergillus niger1，4-二（*基硅烷基）苯 96%二苯 99%

Acetyl CoA二甲基烯酸1,4-丁二酯, 含100ppm MEHQ 稳定剂, 95%4,4'-二氯二苯甲酮 99%

Glucose oxidase二烯酸1,3-丁二酯, 含500 ppm 对苯二酚（HQ）稳定剂, 98%2,4-二羟基二苯甲酮 99%

D-AAO苯磺酸 98%4,4'-二羟基二苯甲酮 98%

Hexokinase from Saccharomyces cerevisiae 正丁硫 standard for GC, ≥99% (GC)2-羟基-4-甲氧基-5-磺酸二苯甲酮 98%

Pepsin（porcine stomach mucose）N-丁基二乙胺 99%4-羟基二苯甲酮 98%

Pancreatin双酚A三双甲基烯酸酯 试剂级2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮 99%

Trypsin(bovine pancreas) 1-苄基哌 97%4-甲基二苯甲酮 98%

Trypsin(porcine pancreas)3-溴苯酚 分析标准品，用于环境分析4,4'-二氟二苯甲酮 99%

Lipase(pocine pancreas)苯甲 无级, 99.8%4-硝基二苯甲酮 99%

Lipase(Candida)乙基叔丁基 分析标准品2-苯基苯并咪唑  98%

CAT4-叔丁基吡啶 98%苯氧乙酸钠 98%

Lysozyme(Chinken egg)邻苯二甲酸丁苄酯 分析标准品1,4-萘醌 95%

甲磺酸雷沙吉兰HIF-1Alpha  缺氧诱导因子1α 多肽SOX10  转录因子SOX10抗体

白藜芦histone H3-like protein  组蛋白H3样蛋白多肽SOSSC/C9orf80  单链DNA结合蛋白相互作用蛋白1

白藜芦（标准品）histone H3-like protein  组蛋白H3样蛋白（C端多肽）Sortilin/NTR3/Gp95  神经降压素受体3抗体（糖蛋白95）

瑞替加滨碱histone H3-like protein  组蛋白H3样蛋白（N端多肽）SorLA/LRP9  低密度脂蛋白受体相关蛋白9抗体

瑞替加滨HIV-1(human immudeficiency virus type 1)  艾滋病病毒-1/人类免疫缺陷病毒1型(抗原)SORBS2/ArgBP2  精氨酸结合蛋白2抗体

利巴韦林HIV-1(human immudeficiency virus type 1)  艾滋病病毒-1/人类免疫缺陷病毒1型(抗原)SORBS2/ArgBP2  精氨酸结合蛋白2抗体

利巴韦林（标准品）Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)  麻疹病毒红血球凝集素蛋白多肽Somatostatin/GRIH  生长抑素抗体

硫酸核糖霉素Measles virus protein(Plant2 derived measles virus hemagglutinin protein)  麻疹病毒红血球凝集素蛋白多肽Solute carrier family 1  溶质携带物家族-1抗体

利福布丁HMGB1 (High Mobility Group Box protein 1)  高迁移率族蛋白-1(抗原)SODD  Bcl2结合抗凋亡蛋白4抗体

利福布丁（标准品）HSL(hormone-sensitive lipase)  荷尔蒙敏感脂肪酸（抗原）SOD4/CCS  超氧化物歧化酶4抗体
诺如病毒型PCR检测试剂盒规格人富组蛋白(HTN5)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10个

人钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人钙离子通道抗体(VGCC)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃500ul

人钙联蛋白(CNX)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人钙腔蛋白(CALU)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT250克

人钙调结合蛋白(CALD)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人钙调磷酸酶(CaN)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：250克

人钙调素(CAM)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫升
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。