*线虫通用PCR检测试剂盒厂家

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
L-Prolil大鼠前脂肪细胞*培养基聚乙二单甲 平均分子量1000

Creatine大鼠成骨细胞*培养基蒽酮 AR

N-Acetyl-L-Valine大鼠关节软骨细胞*培养基N-乙酰-D-半乳糖胺，合 98%

N-Acetyl-DL-tryp tophane大鼠胎儿成纤维细胞*培养基偶氮二甲酸二异酯 95%

N-Acetyl-glycine大鼠胎儿表皮角质形成层细胞*培养基偶氮二甲酸二叔丁酯 98%

D-Tryptophan methyl ester hydrochloride大鼠成年表皮角质形成层细胞*培养基4,4-二溴联苯  98%

L-Cysteine methyl ester hydrochloride大鼠表皮角质形成细胞*培养基3'-羟基苯乙酮 98%

D-Phenylalanine methyl ester hydrochloride大鼠皮下脂肪细胞*培养基硫酸新霉素 USP级,680 I.U./mg

L-Alanine methyl ester hydrochloride大鼠内脏脂肪细胞*培养基土霉素  97%

D-Alanine Methyl Ester Hydrochloride大鼠表皮黑色素细胞*培养基异酸苯酯 99%（）

D-Proline methyl ester hydrochloride大鼠脑动脉血管内皮细胞*培养基邻硝苯 99%

L-Tyrosine methyl ester hydrochloride大鼠脑动脉血管平滑肌细胞*培养基对硝苯 99%

D-Tyrosine Methyl ester hydrochloride大鼠脑静脉血管内皮细胞*培养基间硝苯 CP

D-Leucine methyl ester hydrochloride大鼠脑静脉血管平滑肌细胞*培养基间硝苯 分析标准品

D-Serine methyl ester hydrochloride大鼠脑膜细胞*培养基间硝苯 standard for GC, ≥99.5% (GC)

D-Valine methyl ester hydrochloride大鼠神经元细胞*培养基间硝苯标准溶液 1000μg/ml，溶剂：甲

氢氯噻（标准品）TNF- Beta(Tumor Necrosis Factor- Beta)  肿瘤坏死因子-β抗原surface layer protein  乳酸细菌表面蛋白抗体

醋酸TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1)  肿瘤坏死因子α诱导蛋白1抗原SUR1  磺酰脲类药物受体1抗体

醋酸（标准品）Acetylated-P53(Lys382) peptide  抗肿瘤P53抗原SUPT16H/CDC68  染色体特异性转录延伸因子抗体

盐酸伊达比星TP I (topoisomerase I )  拓普西异构酶Ⅰ抗原SUMO-1/UBC9  泛素蛋白连接酶E2I抗体

甲磺酸伊马替尼TOPO II Alpha/DNA TP II Alpha (DNA topoisomerase II Alpha)  DNA拓普西异构酶Ⅱ抗原SUMO 1  类泛素蛋白抗体

甲磺酸伊马替尼（标准品）TPH (Trptophan Hydroxylase)  色氨酸羟化酶(多肽)SULT2A1  胆盐磺基转移酶

咪喹莫特TRA16 (Testicular orphan nuclear receptor-4 (TR4)-associated protein)  激素受体相关蛋白/孤儿素受体相关蛋白(抗原)SULT1E1/Estrogen Sulfotranferase  雌激素硫酸转移酶抗体

咪喹莫特（标准品）TRADD(TNF receptor 1 associated via death domain)  有死亡区的肿瘤坏死因子受体1相关蛋白抗原SULT1A1  芳基磺基转移酶1抗体

伊立替康TRAF1  肿瘤坏死因子受体相关因子1抗原Sulfatase 2  硫酸酯酶2蛋白抗体

伊立替康(标准品)TRAF2/TNF-R2 (TNF receptor-associated factor 2)  肿瘤坏死因子受体相关因子2抗原Sulfatase 1  硫酸酯酶1抗体
*线虫通用PCR检测试剂盒厂家人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT500克

人胆酸(CA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人弹性蛋白(ELN)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人蛋白C(ProteinC)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人蛋白S(ProteinS)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：0.25毫升

人蛋白Z(ProteinZ)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人蛋白二化物异构酶A3(PDIA3)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃100毫升
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。