脑粘体虫PCR检测试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
L-Alanine人肺微血管内皮细胞*培养基2,3-戊二酮 98%

D-Alanine人肺大动脉内皮细胞*培养基六氟锆酸 45%溶液

DL-Alanine人肺大动脉平滑肌细胞*培养基乙酰 98%

β-Alanine人肺大静脉内皮细胞*培养基芹菜素 97%

BOC-L-Alanine人肺大静脉平滑肌细胞*培养基扁桃苷 分析标准品，>98%

BOC-D-Alanine人肺动脉成纤维细胞*培养基5-氨基乙酰酸盐酸盐 99%

L-Alanine ethlester hydrochloride人肺泡上皮细胞*培养基芦荟大黄素 95%

D-Alanil人气管上皮细胞*培养基氧化苦参碱 分析标准品

L-Arginine人支气管上皮细胞*培养基氧化苦参碱 98%

D-Arginine人小气道上皮细胞*培养基黄芩素 98%

DL-Arginine人肺成纤维细胞*培养基盐酸小檗碱 98%

L-Arginine HCL人支气管平滑肌细胞*培养基黄芩苷 90%

L-精氨酸琥珀酸钡盐人小气道平滑肌细胞*培养基隐丹参酮 98%

L-NNA人气管平滑肌细胞*培养基秋仙碱 98%

L-NAME人支气管成纤维细胞*培养基金雀花碱 98%

L-Citrulline人呼吸道上皮细胞*培养基虫草素  98%

倍他米松（标准品）OTR(oxytocin receptor)  缩宫素受体TIA1  细胞毒颗粒相关蛋白TIA-1抗体

比阿培南OXR (Orexin receptor)  食欲素受体(多肽)Thyroxine Binding Globulin/TBG/Serpin A7  甲状腺素结合球蛋白抗体

比阿培南（标准品）P2P-R/RBBP6(proliferation potential protein related)  增殖潜能相关蛋白抗原THYN1  胸腺细胞核蛋白1抗体

联苯苄唑P19ARF  p19ARF抑癌基因抗原Thymulin  胸腺素抗体

联苯苄唑(标准品)phospho-p38 ERK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) peptide  磷酸化丝裂原活化蛋白激酶p38抗原Thymosin beta 4  胸腺素β4抗体

胆红素(标准品)MKK3(MAP Kinase Kinase 3)  丝裂原活化蛋白激酶MKK3/6抗原Thymosin Alpha-1/PTMA  胸腺肽α1抗体

胆红素P53(wt-p53)  肿瘤抑制基因抗原（野生型P53）Thymidylate synthase/TS  胸苷酸合成酶抗体

比伐卢定(TFA)Mtp53(Mutant type p53)  突变型P53抗原Thy-1/CD90/ Thy1.1  CD90抗体

比马前列腺素/贝美前列素WIG-1(wtp53-induced gene 1)  野生型p53诱导基因1抗原THSD1  血小板跨膜反应蛋白1抗体

比马前列腺素/贝美前列素（标准品）P73 protein  P73肿瘤抑制基因抗原THRSP  甲状腺激素反应蛋白抗体
脑粘体虫PCR检测试剂盒说明书人白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人白三烯D4(LTD4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人白三烯E4(LTE4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT50支/包

人白色念珠菌(C.albicans)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人白细胞弹性蛋白酶(HLE)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃10片

人白细胞共同抗原(LCA/CD45)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100张/包

人白细胞免疫球蛋白样受体亚家族B成员4(LILRB4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克