杆状巴尔通体PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
人α1微球蛋白/bikunin前体（AMBP）elisa试剂盒Anti-GDNF Antibody研究领域 免疫学 信号转导 转录调节因子

人T细胞活化连接蛋白（LAT）elisa试剂盒Anti-GDNF Antibody研究领域 肿瘤 免疫学 信号转导

人SPARC相关模块化钙结合蛋白2（SMOC2）elisa试剂盒Anti-GFAP Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 神经生物学 信号转导

人P选择素（P-Selectin/CD62P）elisa试剂盒Anti-GFAP Antibody(原货号PB0046)研究领域 肿瘤

人P0蛋白抗体（IgG）elisa试剂盒Anti-GFI1 Antibody研究领域 肿瘤 神经生物学

人G蛋白偶联受体109A（GPR109A）elisa试剂盒Anti-GFI1 Antibody研究领域 肿瘤 免疫学 激酶和磷酸酶

人GAD/IA2自身抗体elisa试剂盒Anti-GH1 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导 细胞凋亡

人EB病毒早期抗原（EBEA）抗体（IgG）elisa试剂盒Anti-GFRA1 Antibody研究领域 肿瘤 免疫学

人EJ抗体/抗甘氨酰tRNA合成酶抗体（EJ/GlyRS）elisa试剂盒Anti-GH1 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 细胞凋亡 生长因子和激素 转录调节因子

人D-乳酸脱氢酶（D-LDH）elisa试剂盒Anti-GH1 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 神经生物学 信号转导 细胞凋亡

人CXC趋化因子受体4（CXCR4）elisa试剂盒Anti-GHR Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 转录调节因子

人CD19分子（CD19）elisa试剂盒Anti-GILT/IFI30 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 神经生物学 信号转导 细胞骨架 细胞外基质 泛素

人CD134分子（CD134）elisa试剂盒Anti-GHR Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物

人apelin 12（AP12）elisa试剂盒Anti-GILT/IFI30 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子

人ADP-核糖基化因子5（ARF5）elisa试剂盒Anti-GIP Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 染色质和核信号 信号转导 细胞周期蛋白 转录调节因子

对甲酚p-CresolCP500ml

ER0812MboI1500 units4

P6782-100mgPeroxidase, Horseradish (HRP) 辣根过氧化物酶9003-99-0100mg

BCA Protein Assay Kit500T

马来酸 (顺丁烯二酸)100g

有机担体403403 organic supportGC60-80目25g

ER0922Bsh1236I (BstUI)2500 units11

D2510-10GDexy7cholic 脱氧胆酸201-478-510g

几丁质(甲壳素)10g

Uracil50g

大鼠血小板衍生生长因子(PDGF)ELISA试剂盒 ，英文名： PDGF ELISA Kit

人抗类固醇细胞抗体(SCA)ELISA检测试剂盒Humansteroidcellaoaibody,SCAELISAKit 96T/48T

大鼠Ras相关C3肉毒素底物1(RAC1)免疫试剂盒 Rat Ras-related C3 Botulinum Toxin Subsate 1,RAC1 ELISA Kit

CLIAKitforSP-A(MousePulmonarysurfatca-associatedproteinA)ELISAKit小鼠肺表面活性物质相关蛋白A规格：48T/96T

肉类总乳酸比色法定量检测试剂盒20次

ELISAKitAVP人精氨酸加压素规格：48T/96T
杆状巴尔通体PCR检测试剂盒说明书人非小细胞肺癌细胞，NCI-H1915细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人非小细胞肺腺癌细胞，NCI-H157细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人肺癌细胞(淋巴结转移)，NCI-H292细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人肺癌细胞,A549细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人肺癌细胞，Calu-1细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶

人肺癌细胞，NCI-H2126细胞1 x 10^6 cells/T25培养瓶
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。